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题目：
雅宝题库答案：
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雅宝题库解析：
目的：儿茶酚是重要的工业和制药原料，也是苯在体内的主要代谢产物之一，而苯是常见的职业危害因素和室内外环境污染物，可以引起人体的血液毒性和骨髓毒性。课题组之前的研究表明，苯的酚类代谢物（苯酚、氢醌、1,2,4-苯三醇）能够通过影响K562细胞红系相关基因的甲基化抑制K562细胞的红系分化。然而，初步研究表明，儿茶酚对K562细胞的红系分化具有不同于其他苯代谢物的作用。儿茶酚是儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）的底物，该酶可通过消耗甲基供体S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）和生成甲基转移酶抑制剂S-腺苷-L-半胱氨酸（SAH）抑制基因的甲基化。本研究旨在明确儿茶酚对K562细胞红系分化的影响并探讨COMT在其中所起的作用，从而初步研究儿茶酚对K562细胞红系分化影响的机制。方法：K562细胞经不同浓度的儿茶酚，40μM的SAM或SAH处理后，培养48或72h，经氯化高铁血红素（Hemin）诱导后，联苯胺染色法检测K562细胞红系分化情况。加入上述物质培养48或72h后，采用反转录PCR的方法检测K562细胞红系相关基因α-globin、β-globin、γ-globin、PBGD、ALAS2、GATA-1、NF-E2的mRNA表达水平。提取核基因组DNA后利用定量MassARRAY甲基化检测法检测上述红系相关基因甲基化水平。采用插入针对COMT基因的siRNA的质粒转染K562细胞，用G418筛选出COMT低表达的K562细胞。通过RNAi沉默COMT表达的K562细胞经儿茶酚处理后，利用反转录PCR法检测COMT基因沉默后儿茶酚对K562细胞红系相关基因mRNA表达的影响。结果：儿茶酚能够呈浓度依赖性促进血红蛋白和红系相关基因mRNA的合成。单独加入SAM以及单独加入SAH都会促进K562细胞红系分化，加入儿茶酚后再加入SAM，红系分化程度较单独加入儿茶酚或SAM升高。经儿茶酚处理后，K562细胞中红系相关基因甲基化程度发生了一定程度的变化，所有甲基化程度改变具有统计学差异的位点中，除α珠蛋白检测区域1的CpG37、38位点外，其余甲基化程度均降低。RNAi沉默COMT基因的表达后，儿茶酚对K562细胞红系相关基因α-globin、β-globin、PBGD的mRNA合成的促进作用消失。结论：研究发现儿茶酚能够促进K562细胞的红系分化能力，在这个过程中，儿茶酚通过COMT代谢产生甲基转移酶抑制剂SAH抑制红系相关基因甲基化，从而促进了K562细胞的红系分化。 |
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发表于 2022-4-26 22:51:52
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