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【中图分类号】R214 【文献标识码】A 【文章编号】1 12－3183(2011)12－0348－01
【摘要】
目的：确定金乌骨痛片最佳提取工艺方法。方法：采用正交试验筛选提取工艺，以淫羊藿中淫羊藿苷的含量为考察指标优选水提工艺。考察各因素的影响。结果：最佳制备工艺条件为：取除葛根、姜黄之外的其余8位药材加10倍水，煎煮3次，每次1.5小时。结论：通过正交试验优选出金乌骨痛片的最佳制备工艺，该制备工艺稳定。
【关键词】中药；骨质增生；金乌骨痛片；制备工艺
金乌骨痛片处方由金毛狗脊、乌梢蛇、葛根、淫羊藿、木瓜、土牛膝、土党参、姜黄、威灵仙、补骨脂等十余味中药组成。本方既突破常规,又契合中医中药理论。因本处方中与药理作用相关的有效成分以水溶性居多，因此以测定淫羊藿中的有效成份淫羊藿苷含量为指标，以正交试验考察水提工艺。提取工艺路线初步确定后，采用正交实验、结合制剂制备条件等实际情况优选金乌骨痛片的最佳提取工艺和制备方法。
1 仪器与材料
1．1 仪器:日本岛津高效液相色谱仪：LC一10ATvp泵、SPD-10Avp检测器；浙江大学智能信息公司N一2000双通道色谱工作站；H54AR 1型十万分之一电子天平。KQ-250B超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；D24-0.8离心机(北京医用离心机厂)。
1．2 试药:药材饮片购于邢台市恒祥大药房，所用化学试剂均为分析纯。淫羊藿苷标准品购自中国药品生物制品检定所（批号1103131-200 14，供含量测定用）。
2 方法
2．1 工艺路线设计:工艺中葛根、姜黄为生粉，故制备工艺中，葛根、姜黄粉碎、过80目筛，以生粉入药。其余8味药材适当破碎，按照正交设计筛选出的最佳方法用水提取，静置沉降分离、滤过，取滤液浓缩成清膏，加入葛根、姜黄大黄生粉充分混匀成软材，干燥后粉碎、过80目筛，灭菌，加入辅料进行压片，包薄膜衣。
2．2 提取工艺
2．2．1 水提取工艺的正交设计:选取对提取物收率影响较大的加水倍数(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为考察因素，以淫羊藿的含量为考察指标，按四因素三水平进行试验。
2．2．2 试验方法: 按照处方比例称取除葛根、姜黄之外的另外8昧药材11 0g(含淫羊藿200g)，适当破碎，按正交因素表所列条件加水煎煮，合并提取液，浓缩至约450mL，置500mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀成水提浓缩液。
2．2．3 淫羊藿苷的测定
2．2．3．1 标准溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的淫羊营苷对照品20mg，置100mL量瓶中,加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置25m1量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，成标准溶液（每1mL中含淫羊藿苷8μg）。
2．2．3．2 供试品溶液的制备:精密量取“2．2．2”项下的水提浓缩液5mL，置25mL棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，高速离心分离10min，取上清液即为供试品溶液。
2．2．3．3 测定方法:经过试验，采用HPLC法，选用C18柱为固定相，用磷酸溶液(0.015 mol•L-1，用三乙胺调整pH为4.5)：乙腈 (10：30)为流动相，测定波长210nm，柱温：30℃，流速1.0mL•min-1，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各20μl进样，测定峰面积，计算含量，即得。
2．2．3．4 结果分析: 通过统计软件SAS v ．12对试验数据进行方差分析，对各因素的影响大小的显著性进行分析，最佳制备工艺条件为：取除葛根、姜黄之外的其余8位药材加10倍水，煎煮3次，每次1.5小时。
2．3 制剂成型技术的研究
2．3．1 试生产: 按处方比例称取葛根200g、姜黄120g，粉碎过80目筛成备用粉(I)。取另外8昧药材：金毛狗脊1 0g、乌梢蛇120g、淫羊藿200g、木瓜120g、土牛膝120g、土党参120g、威灵仙1 0g、补骨脂1 0g，按照正交试验确定的最佳提取条件加水适量共煎。煎液合并，静置12小时滤过，上清液减压浓缩至相对密度1．25-1.35(50℃)之清膏，加入备用粉(I)充分混匀，成软材，10-80℃干燥，干燥物粉碎过80目筛，置雅菌室紫外灯灭菌，密封储存。
3 结果
3.1 水提取工艺的确定:从正交实验结果可见，以淫羊藿苷提取率为考察指标，影响大小依次为：提取次数>水用量>提取时间，最佳工艺为A3B2C3，即lO倍量水，提取3次，每次1.5h。
3.2 水提取工艺试验结果分析:通过对正交实验结果进行方差分析，对各因素的影响大小的显著性进行了检验，可见，在三个因素中，提取次数(C)对淫羊藿苷提取率提取率影响最大，水用量(A)对淫羊藿苷提取率影响次之，提取时间(B)对其提取率影响最小。可见，理论上最佳水提条件为：10倍量水，提取3次，每次1.5h。因提取时间对淫羊藿提取率的影响不显著，为节约能源、降低成本，实际生产中考虑调整提取条件为第一煎1O倍量水，1.5小时；第二煎10倍量水，1小时；第三煎8倍量水，1小时。
4 讨论
制备工艺研究是中药新药开发最主要的环节之一，关系到制剂的有效性、稳定性、适用性和经济技术的合理性，其中关键问题就是“提取与分离& uot;，即如何最大限度的保留有效成分，去除雅效成分。本处方组方药味多，主药有效成分均易溶于水，且原组方水煎剂临床应用疗效佳，所以提取工艺设计中，主要用正交试验筛选水提工艺。正交试验中除测定淫羊藿苷含量外，同时也考察了干浸膏收率，根据极差值显示其受煎煮次数和加水量影响规律变化，不是直接反映提取率的主要因素，故未列入分析数据。中药水提取液常用的纯化方法为“水提醇沉”，预试验中取水提浓缩液对醇沉和静置沉淀分离作了比较，结果显示经醇沉处理，回收乙醇后药液粘度增大，浓缩清膏黏性也增大，不利于与大黄生粉混合均匀，同时也影响干浸膏粉碎过筛。因此暂选用静置沉淀后过滤的方法分离，减压浓缩至清膏备用，缩短生产周期，操作简单同时可减少对光、热不稳定的有效成分的损失。中药的分离纯化方法除醇水法外，常可用的还有澄清剂法、超滤法、大孔树脂吸附法等［4-5］。因中药复方制剂成分复杂，有效成分多样，如何应用其它分离纯化方法以适宜的条件对其进行提纯精制还有待进一步研究。
参考文献
［1］ 郑文奎，刘春颖，韩翠玉等，金乌骨通胶囊治疗绝经后骨质疏松症的临床研究［J］，中国中医骨伤科杂志，2001，3(15)：30-32
［2］ 王金台，王淑玲，郝新洁，金乌骨通胶囊治疗绝经后骨质疏松的临床研究［J］，中国实用医药，2008，12(3)：141-148
［3］ 吴征，李署波，金乌骨通胶囊治疗骨性关节炎5 例临床观察［J］，中国中医骨伤科杂志，2005，4 (13)42
［4］ 《中国药典》2005年版(第一部) ［S］．2005：229．
［5］ 王志平等，淫羊藿提取液的树脂吸附及醇沉工艺对比研究［J］，离子交换与吸附，2003，19( )：554～5 0
作者单位：054000 河北国金药业有限责任公司
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发表于 2020-6-28 11:07:20
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